FITC PE APC**熒光共染

從理論上來說，**熒光三染（特指不要求Dapi的那種），一般選擇 紅 綠 藍三種顏色，比較容易區(qū)分。首先說明的是，熒光在機器上的原始顏色其實并不重要，顏色只是肉眼觀察到的顏色，實際上*后的信號是通過機器檢測相應熒光染料被激發(fā)后的發(fā)射光的波長和強度而產生的，那么這也就是說明重要的是你的激發(fā)光和發(fā)射光之間的區(qū)間能否區(qū)別開，而實際上熒光染料本身發(fā)射出來的顏色*后并不重要，通過軟件每種染料的顏色我們都可以調成任意其他顏色，比如你的Fitc 默認是綠色，但是如果你想要紅色，直接更換顏色就可以了，（我用的是leica的機器），理論上來說olympus 的機器也是一樣的。再就是你的這個體系中APC 由于激發(fā)和發(fā)射光的區(qū)間都在600以后，和你的Fitc 和 PE不然不沖突。而PE的發(fā)射區(qū)光波長區(qū)間和FITC的也離得很遠，所以不太沖突。難辦的是，Fitc 吸收光峰值在488，而PE的吸收峰區(qū)間在 490-560，這也就導致你直接選擇PE模式去激發(fā)熒光，必然會激發(fā)Fitc，從而產生重疊的熒光信號，使得*后結果特異性（就是能否區(qū)分的特性）較差，但是PE的吸收波長區(qū)間很大，建議可調高PE的吸收波長長度，從而較好的在激發(fā)PE的時候而不會激發(fā)Fitc 從而顯著提高。綜上所述你的三染模型理論上是可以行的通的，Fitc 選擇 488 激光管激發(fā)，PE選擇543激光管激發(fā)，而APC選擇633 激光管激發(fā)即可，至于顏色可以選擇綠，紅，藍，或者綠，紅，紫色(或者灰白色)，至于藍色可以用來染色DAPI。

我還是覺得采用激光共聚焦的順序掃描應該可以完全解決串色干擾的問題。至于顏色，可以自己調節(jié)。

如果你的共聚焦顯微鏡的熒光染料庫里沒有你所用給的染料，簡單的辦法就是選擇跟你的染料的*接近的染料，而不是隨便就選擇一個。

如果共聚焦顯微鏡的配置有光譜拆分的話，就更不用擔心干擾的問題，因為這個拆分可以把發(fā)射光譜非常接近的熒光也可以被清楚分離。

如果還解決不了問題的話，可以(推薦使用）直接跟共聚焦的廠家的工程師聯系（官網上肯定有聯系方式的），他們會很樂意幫助你的餓，而且可以很快的解決問題。

ps：你的共聚焦是什么牌子和型號的啊？