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產(chǎn)品資料

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒

如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
產(chǎn)品名稱: 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒
產(chǎn)品型號: MMP10
產(chǎn)品展商: HZbscience
產(chǎn)品文檔: 無相關(guān)文檔

簡單介紹

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒我司專業(yè)銷售ELISA試劑盒,提供免費代測服務(wù),各種種屬、各種系列ELISA科研實驗檢測試劑盒均備足現(xiàn)貨,廣泛的產(chǎn)品范圍可以滿足眾多客戶的要求。小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒質(zhì)量有保證,能給您帶來*滿意的實驗效果。


小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒  的詳細(xì)介紹

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒

使用說明書

尊敬的客戶,感謝您選用本公司ELISA系列產(chǎn)品,本產(chǎn)品選用世界有名生產(chǎn)廠家的原料,采用專業(yè)體外診斷試劑生產(chǎn)技術(shù)制造。適用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中天然重組小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)濃度。僅供科研使用,其他特殊體液標(biāo)本請咨詢。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分。如有疑問,請聯(lián)系銷售人員!

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒組成:

中文名稱

英文名稱

規(guī)格

保存

ELISA酶標(biāo)板(可拆卸)

Micro ELISA  Plate(Dismountable)

8×12 / 8×6*

4/-20 #

凍干標(biāo)準(zhǔn)品

Reference Standard

2/1 *

4/-20 #

標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液

Reference Standard & Sample Diluent

1 20mL/12mL*

4

濃縮生物素化抗體

Concentrated Biotinylated Detection Ab

1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化抗體稀釋液

Biotinytated Detection Ab Diluent

1 10mL/6mL*

4

濃縮HRP酶結(jié)合物

Concentrated HRP Conjugate

1 120μL/70μL*

4(避光)

酶結(jié)合物稀釋液

HRP Conjugate Diluent

1 10mL/6mL*

4

濃縮洗滌液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

1 10mL/6mL*

4(避光)

反應(yīng)終止液

Stop Solution

1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

5/3 *

 

產(chǎn)品說明書

Product  Description

 

質(zhì)檢報告

Certificate of Analysis

 

特別說明
*: [96T/48T](打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整)
#: 
一周內(nèi)使用可存于4,需長時間存放或多次使用建議存于-20.              

相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些,請在使用時量取而非直接倒出!

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法:抗小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)會與單抗結(jié)合,游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體,抗小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)結(jié)合而形成**復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應(yīng)孔中有基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10),辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450nm處測OD值,基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)濃度。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)**試管。

2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會

影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測

6. 樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品*高值,請根據(jù)實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。

試驗所需自備物品:

1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)

2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為400ng/mL)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。  

4. 生物素化抗體工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據(jù)實際用量來稀釋,如200μL/管)

 洗滌方法:

任何一個成功的ELISA檢測,正確的洗板方法是非常關(guān)鍵和重要的一方面。連貫的洗板也很有必要的。在稀釋濃縮洗滌液時,請使用去離子水或者蒸餾水。

◆ 洗滌瓶或多通道移液器

保證洗瓶內(nèi)壓強良好或者移液器的管頭被適當(dāng)調(diào)整并且無碎屑。檢查板內(nèi)的板條是否安好。將板條編號以防在傾泄的時候松動便于調(diào)整。首先,傾泄酶標(biāo)板以清空內(nèi)容物。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實驗步驟中要求浸泡,則定時將每孔浸泡完全。將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾擦拭。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。*后一次洗板之后,將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進行下一步實驗操作。

◆ 自動洗板儀

將自動洗板儀接入適當(dāng)真空(根據(jù)制造商的說明)。確保每管都被適當(dāng)抽吸。首先,通過吸或者傾倒將板清空。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實驗步驟中要求浸泡,則定時將每孔浸泡完全。完全抽吸各孔,保證沒有洗液殘留。在孔內(nèi)液體被完全抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過分抽吸。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。*后一次洗板之后,將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進行下一步實驗操作。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 100μL,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100μL,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育 90 分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液 100μL(在使用前15 分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育 1 小時。

3. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分鐘,大約 350μL/每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4. 每孔加酶結(jié)合物工作液(臨用前 15 分鐘內(nèi)配制)100μL,加上覆膜,37℃溫育30 分鐘。

5. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次,方法同步驟3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15 分鐘左右(根據(jù)實際顯**況酌情縮短或延長,但不可超過30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。

7. 每孔加終止液 50μL,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度(OD 值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。

9. 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒注意事項:

◆ 仔細(xì)閱讀說明書。

◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過有效期,請勿使用。

◆ 按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。

◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存。

◆ 準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標(biāo)儀)。

◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫,根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件,保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書推薦的條件存儲。

◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測稀釋液,可能在設(shè)計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標(biāo)板之前,必需不停攪拌。

◆ 保證充分的孵育時間和溫度。

◆ 切勿使用不同生產(chǎn)批號的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

◆ 在混合或溶解蛋白溶液時,避免泡沫產(chǎn)生。

◆ 在實驗開始之前,安排好實驗流程。

◆ 在實驗開始之前,清潔工作臺。

◆ 若有問題,應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系  

結(jié)果判斷:

1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設(shè)置復(fù)孔,則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.3或1.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)檢測試劑盒靈敏度、檢測范圍、特異性和重復(fù)性:

●靈敏度:*小可測:2.35pg/mL

●檢測范圍:6.25-400pg/mL

● 重復(fù)性:板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。

● 特異性:可檢測重組或天然的小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10),且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

操作概要

1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各 100μL, 37℃孵育 90 分鐘

2. 倒去孔內(nèi)液體,加入 100μL 生物素化抗體工作液,37℃孵育 60 分鐘

3. 洗滌 3 次

4. 加入 100μL 酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育 30 分鐘

5. 洗滌 5 次

6. 加入 90μL 底物溶液, 37℃孵育 15 分鐘左右

7. 加入 50μL 終止液,立即在 450nm 波長處測量 OD 值

8. 結(jié)果計算  

問題分析

若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后

聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。

我是按照實驗步驟進行測定的,但是沒有任何信號,為什么?

◆ 對于使用HRP底物的比色測定,終止液的加入會使底物變色。而說明書推薦的波長就是*適波長。

◆ 通過輕拍酶標(biāo)板的邊緣充分混合孔內(nèi)試劑。加入終止液的時,顏色由藍(lán)變黃(如果是HRP

底物)。如果加終止液之前孔內(nèi)試劑沒有混合,則底物顏色變綠。

◆ 可能加入試劑的順序錯誤。

◆ 加入底物溶液以后不要清洗酶標(biāo)板。

◆ 在連續(xù)稀釋時確定已經(jīng)加入標(biāo)準(zhǔn)品。

◆ 如果底物系統(tǒng)中有兩個成分,則必需混合均勻。

◆ 確定酶標(biāo)儀的使用和操作正確。

◆ 確定試劑,標(biāo)準(zhǔn)品,樣品都正確配制并按照說明滴加無誤。

◆ 對于高敏感性試劑盒,確定使用的底物和放大劑都正確稀釋。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011702004356號

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