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產品資料

大腸桿菌Top10F'菌種

如果您對該產品感興趣的話,可以
產品名稱: 大腸桿菌Top10F'菌種
產品型號: HZ12-204y
產品展商: HZbscience
產品文檔: 無相關文檔

簡單介紹

大腸桿菌Top10F'菌種主營產品包括RNA純化系列、DNA純化系列、電泳及回收系列、克隆表達系列等在分子水平上,分子生物學著重研究的是大分子,大腸桿菌Top10F'菌種主要是蛋白質,核酸,脂質體系以及部分多糖及其復合體系。而一些小分子物質在生物體內的轉化則屬生物化學的范圍.


大腸桿菌Top10F'菌種  的詳細介紹

大腸桿菌Top10F'菌種RealTime PCR技術服務:

一、熒光定量PCR化學原理介紹  

實時熒光定量PCR技術即是在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監測整個PCR進程,*后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

二、大腸桿菌Top10F'菌種主要實驗步驟

1、設計并合成Realtime PCR引物。

2、引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進行含SG(SYBR® Green)的PCR反應的優化。

3、 樣品RNA抽提   實驗對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),勻漿后抽提RNA。

實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加1ml的RNA抽提試劑Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA

4、RNA質量檢測

a. 大腸桿菌Top10F'菌種紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,以計算其濃度并評估RNA純度

b. 使用ambion公司的甲醛電泳試劑進行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測RNA純度及完整性。

5、使用逆轉錄酶(Promega)進行反應,將樣品RNA逆轉錄為cDNA。

6、 制備標準曲線樣品:進行相對定量,需要先將樣品的目的基因以及管家基因進行PCR擴增,其產物進行梯度稀釋用于做標準曲線。

7、標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTime PCR反應液中(其中TaqBeadTM熱啟動聚合酶來自Promega公司),進行RealTime PCR擴增和檢測。

8、 大腸桿菌Top10F'菌種檢測結果進行標準曲線分析:以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差,所得結果代表某樣品的目的基因相對含量。

9、提供實驗報告:包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR實驗結果的相關圖表。

三、大腸桿菌Top10F'菌種樣本準備

組織或細胞標本

滬公網安備 31011702004356號

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