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產品資料

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

如果您對該產品感興趣的話,可以
產品名稱: 志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
產品型號: SH
產品展商: HZbscience
產品文檔: 無相關文檔

簡單介紹

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)用特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)RNA 進行體外擴增檢測,不同批號的試劑盒組分不可交互使用,此試劑盒僅供科研使用。


志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)  的詳細介紹

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

【包裝規格】48 份/盒

【檢測方法】RT-PCR 熒光探針法

【檢驗原理】

本試劑盒用特異性引物,結合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術對志賀氏菌(SH)RNA 進行體外擴增檢測,僅用于科研使用。

【試劑組成】

名 稱

規 格

酶液

50μl×1 管

反應液

1.0ml×1 管

陽性質控品

50μl ×1 管

陰性質控品

250μl ×1 管

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJOpticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

剖檢豬取腸內容物和腸系膜**結;待檢活豬,取排泄物,于離心管中。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1樣本前處理

組織:分別從腸系膜**結的 3 個不同位置取樣,稱取樣品約 1g,用手術剪剪碎混勻,再稱取 0.05g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL **離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL **離心管中;排泄物:取 0.05g 于 1.5mL **離心管中,加入 1mL生理鹽水渦旋振蕩,8000rpm 離心 2min,取上清液 100uL 于 1.5mL **離心管中。

1.2RNA 提取

RNA 提取試劑盒(離心柱提取法),請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區)

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑

反應液

酶液

用量

20μl

1μl

3. 加樣(樣本處理區)

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇:

檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環參數設置:

步驟

循環數

溫度

時間

收集熒光信號

1

1cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycle

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數增長曲線;

可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

6. 檢測方法的局限性

? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

? 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;

? 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質控標準

陰性質控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32;

以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為 100%。

*低檢測限:5.0×102copies/ml。

精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。

志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行;

? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;

? 反應液應避光保存;

? 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物**通則》進行處理。

轉基因植物PRSV基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬特定基因序列(Porcine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
牛特定基因序列(Bovine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
羊特定基因序列(Ovine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
豬特定基因序列(Porcine)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
雞特定基因序列(Chicken)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
鴨特定基因序列(Duck)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
鹿特定基因序列(Deer)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。
魚特定基因序列(Fish)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 規格:48人份/盒 精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(CV)均小于等于 3%。

滬公網安備 31011702004356號

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