pOptiVEC-TOPO載體描述： OptiCHO Express 試劑盒設計用于懸浮培養物中二氫葉酸還原酶缺陷型 (DHFR-) 中國倉鼠卵巢 (CHO) DG44 細胞的高效生長和轉染。 該試劑盒為在無血清環境中高效轉染 DHFR- DG44 細胞以及隨后開發穩定的細胞系提供完整的實驗流程以及所需的試劑，包括：
pOptiVEC-TOPO 載體 - 雙順反子克隆載體，包含在 CHO-DG44 細胞中開發穩定細胞系所需的 DHFR 基因（圖 1）；載體與 TOPO 兼容，能夠以 >85% 的效率克隆包含目的基因的 PCR 產物
FreeStyle MAX 轉染試劑 - 無動物來源成分的轉染試劑，可提供較高的轉染效率和一致的結果
CD OptiCHO 培養基 - 化學成分確定的無蛋白質培養基（不含次黃嘌呤或胸苷），設計用于重組 CHO-DG44 細胞的高密度懸浮培養和分泌蛋白的生產
CD DG44 培養基 - 化學成分確定的無蛋白質培養基，添加次黃嘌呤和胸苷，支持 DG44 細胞在懸浮培養中的*優生長DG44 細胞 - 針對 CD DG44 培養基預先進行過馴化，并經過篩選以進行高效的細胞生長和轉染
此外，OptiCHO Express 試劑盒提供 GIBCO OptiPRO SFM 以促進 DNA-脂質體復合物的形成，提供 L-谷氨酰胺（單獨提供，以增加培養基的穩定性）和 Pluronic F-68 以控制懸浮培養物中的剪切力。
儲存條件：
在 15°C 至 30°C 儲存 Pluronic F-68。在 2°C 至 8°C 避光儲存 OptiPRO SFM、CD OptiCHO 培養基和 FreeStyle MAX 轉染試劑。 在 -5°C 至 -20°C 儲存 L-谷氨酰胺、pOptiVEC-TOPO 載體、CMV 正向測序引物和 EMCV IRES 反向測序引物。在 -80°C 儲存 One Shot TOP10 化學感受態大腸桿菌細胞。在液氮中儲存 DG44 細胞。 pOptiVEC-TOPO載體含有以下元件： Human cytomegalovirus (CMV) immediate-early promoter/enhancer for high-level gene expression in a wide range of mammalian cells
TOPO Cloning site for rapid and efficient cloning of Taq-amplified PCR products
Internal Ribosome Entry Site (IRES) from the encephalomyocarditis virus (EMCV) for cap-independent translation of DHFR
Dihydrofolate reductase (DHFR) gene for auxotrophic selection of transfected DG44 cells and for genomic amplification of stable cell lines using methotrexate (MTX)
The Herpes Simplex Virus thymidine kinase polyadenylation signal for proper termination and processing of the recombinant transcript
pUC origin for high copy replication and maintenance of the plasmid in E. coli
Ampicillin (bla) resistance gene for selection in E. coli
