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產品資料
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pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV

如果您對該產品感興趣的話,可以
產品名稱: pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV
產品型號:
產品展商: HZbscience
產品文檔: 無相關文檔

簡單介紹

pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV的各批次質粒菌株發貨前均經過嚴格的多重驗證,如存在質量問題,請在收到產品的三個月內通知我司。收到pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV后請短暫離心,取2μl轉化至對應感受態中,挑取單克隆重新提取質粒后使用。


pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV  的詳細介紹

pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV載體基本信息

載體名稱: pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV
質粒類型: 慢病毒表達載體;cDNA表達載體
克隆方法: 多克隆位點,限制性內切酶
啟動子: MSCV
載體大小: --
5' 測序引物及序列: 5’-GGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAAT-3’
3' 測序引物及序列: --
載體標簽:
載體抗性: 氨芐青霉素(Ampicillin)
篩選標記: 嘌呤霉素
克隆菌株: E.coli cells(RecA-)推薦: Stbl2 ,OmniMAX 2 T1R
宿主細胞(系): 造血干細胞和胚胎干細胞
備注: pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV慢病毒表達載體是基于HIV的慢病毒載體;
用于cDNA表達和克?。桓咝мD染細胞,建立穩定細胞系,表達水平高;
單一啟動子,由MSCV啟動子驅動目 的基因和下游報告基因轉錄為雙順反子;
二者之間含一段T2A肽,能夠在翻譯后水平上自我剪切,保證目的蛋白與熒光蛋白同等水平翻譯。
產品目錄號: CD522A-1
穩定性: 穩表達
組成型/誘導型: 組成型
病毒/非病毒: 慢病毒(HIV)

pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV載體質粒圖譜和多克隆位點信息

pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV載體簡介

背景簡介:

This manual provides details and information necessary to generate expression constructs of your gene of interest in the pCDH cDNA Cloning and Expression Lentivectors. Specifically, it provides critical instructions on amplification and cloning cDNA into the pCDH vectors, and verification of the final expression constructs. This manual does not include information on packaging the pCDH expression constructs into pseudotyped viral particles or transducing your target cells of choice with these particles. This information is available in the user manual Lentivector Expression Systems: Guide to Packaging and Transduction of Target Cells which is available on the SBI website. Before using the reagents and material supplied with this system, please read the entire manual.

基于HIV-1的pCDH 慢病毒載體特征:

 Multiple Cloning Site (MCS)—for cloning the gene of interest in the MCS located downstream of the CMV promoter.
 WPRE element—enhances stability and translation of the CMV-driven transcripts.
 SV40 polyadenylation signal—enables efficient termination of transcription and processing of recombinant transcripts.
 Hybrid RSV/5LTR promoter—provides a high level of expression of the full-length viral transcript in producer 293 cells.
 Genetic elements (cPPT, gag, env, LTRs)—necessary for packaging, transducing, and stably integrating the vira expression construct into genomic DNA.
 SV40 origin—for stable propagation of the pCDH plasmid in mammalian cells.
 pUC origin—for high copy replication and maintenance of the plasmid in E.coli cells.
 Ampicillin resistance gene—for selection in E.coli cells.

pCDH 慢病毒表達載體的優勢:

Lentiviral expression vectors are the most effective vehicles for the delivery and expression of a gene of interest to almost any mammalian cell—including non-dividing cells and model organisms (C.A. Machida, 2003; M. Federico, 2003; W. C. Heiser, 2004). As with standard plasmid vectors, it is possible to introduce lentivector expression constructs in plasmid form into the cells with low-to-medium efficiency using conventional transfection protocols. However, by packaging the lentivector construct into viral particles, you can obtain highly efficient transduction of expression constructs—even with the most difficult to transfect cells, such as primary, stem, and differentiated cells. The expression construct transduced in target cells is integrated into genomic DNA and provides stable, long-term expression of the target gene.

pCDH 慢病毒載體的包裝載體及細胞系

The expression lentivector contains the genetic elements responsible for packaging, transduction, stable integration of the viral expression construct into genomic DNA, and expression of the target gene sequence. The packaging vector provides all the proteins essential for transcription and packaging of an RNA copy of the expression construct into recombinant viral particles. To produce a high titer of viral particles, expression and packaging vectors are transiently co-transfected into producer mammalian cells (e.g., HEK 293 cells). For a detailed description of SBI’s Lentivector expression system,please refer to the Lentivector Expression System user manual.

啟動子的選擇:

SBI provides a collection of cDNA cloning and expression vectors for various applications. A gene of interest can be cloned under a CMV or EF1 promoter with or without another expression cassette for a reporter gene (copGFP or PuroR). Genes can be either expressed transiently through transfection or stably expressed in a target cell line through transduction with packaged viral particles.

The major concern of cDNA expression in lentivectors is the efficiency level and stability of expression in target cell lines.
The Cytomegalovirus (CMV) promoter is a strong and most commonly used viral promoter that constitutively expresses downstream genes. While the CMV promoter works perfectly in the most common cell lines, it shows poor expression in some stem cell lines and hematopoietic cell lines (R.F. Doll, 1996; E.D. Papadakis, 2004).

The housekeeping elongation factor 1α (EF1) promoter has been shown to exceed and outlast CMV-mediated expression in retroviral, lentiviral, and adenoviral vectors, in hematopoietic cell lines (K. Tokushige 1997; H. Nakai, 1998; C. Teschendorf, 2002). EF1 also performs well in most common cell lines.

MSCV promoter is the 5’-LTR promoter of murine stem cell virus. When a portion of the U3 region of the 3’ HIV LTR was replaced with the U3 region of MSCV LTR, the resulted hybrid HIV/MSCV LTR has dramatically increased the transgene expression level in human CD34+ hematopoietic cells (J.K. Choi, 2001). After integration into genomic DNA, this promoter transcribes a long transcript with an intron in the 5’UTR flanked with splice donor and acceptor sites derived from the lentiviral vector. Further studies found that additional CpG mutations in the MSCV LTR reduced transcriptional silencing in embryonic stem cells (C.S. Swindle, 2004). We constructed cDNA expression vectors with the CpG-deficient MSCV incorporated into the 3’ HIV LTR. After integration into genomic DNA, 3’MSCV/LTR will replace the 5’LTR and provide a high level of expression of the target gene and reporter gene downstream.

SBI第三代慢病毒載體

SBI offers a third generation of the most popular HIV-1 based lentivector expression system which consists of three maincomponents:
(1) The lentiviral expression vector (e.g., pCDH-EF1-MCS-T2A-Puro)
(2) The lentiviral packaging plasmids (e.g., pPACKH1 Packaging Plasmid mix)
(3) A pseudoviral particle producer cell line (e.g., 293TN cells)

2A Peptide-enabled dual expression system
Coexpression of a reporter gene together with a gene of interest is a useful approach for selecting transfected or transduced cells. This is commonly achieved by using two independent internal promoters, such as CMV and EF1 in pCDH-CMV-MCSEF1- copGFP, or by linking two transgenes with an internal ribosomal entry site (IRES) element in a single bicistronic transcript. Many dual promoter pairs have shown a high level of expression of both transgenes in standard cell lines— however, promoter interference often occurs in some cell lines. There are also two main problems that limit the use of IRES: the large size and the imbalanced expression between the first and second cistrons (H. Mizuguchi, 2000; X.Yu, 2003).
The “self-cleaving” 2A peptides have been used successfully to generate multiple proteins from a single promoter in many applications (P. de Felipe, 2004; M.J. Osborn, 2005; P. de Felipe, 2006). The 2A-like sequences exist in several  viruses  and are used to mediate protein cleavage from a single open reading frame. Through a ribosomal skip mechanism, the 2A peptide prevents normal peptide bond formation between the 2A glycine and the 2B proline without affecting the translation of 2B (M.L. Donnelly, 2001):SBI’s cDNA expression vectors incorporate the 2A-like sequence (T2A) from the insect virus Thosea asigna to mediate the coexpression of a reporter gene with the target cDNA. Reporter genes have been cloned at either the first or second positions, and we achieved high expression levels at both locations. 
pCDH Lentivectors 選擇指南

pCDH-MCS-T2A-Puro-MSCV載體序列

hz-6478R CPE  胰羧肽酶E抗體
hz-6479R Myotilin  肌收縮蛋白MYOT抗體
hz-6499R PMCA  細胞膜鈣轉運ATP酶抗體
hz-6500R GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基丁酸受體α3抗體
hz-5162R NChz/AADACL1  中性膽固醇酯水解酶1抗體
hz-6501R Rab25  癌基因RAS相關蛋白Rab25抗體
hz-6502R Testis  腫瘤抑制基因Testin抗體
hz-6503R ZNF288/ZBTB20  鋅指蛋白288抗體
hz-6505R ALOX15/15 Lipoxygenase 1  花生四烯酸15脂氧合酶1抗體
hz-6506R ABI3BP  ABI基因家族成員3結合蛋白抗體
hz-6507R MTCBP1/ADI1  膜型基質金屬蛋白酶胞質尾結合蛋白1抗體
hz-6508R BCMP11/AGR3  乳腺癌膜蛋白11抗體(前梯度同源蛋白2)
hz-6509R ALDH1A1  胞質乙醛脫氫酶1抗體
hz-6510R ABH8/ALKBH8  AlkB同源蛋白8抗體
hz-6511R AMFR/Gp78/RNF45  環指蛋白45/自分泌運動因子受體抗體
hz-6512R AMBP/Alpha 1 microglobulin  α1微球蛋白抗體
hz-6513R A2BP1/Fox1  共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體
hz-6514R RLLM1/C14orf166  胰腺癌轉移相關蛋白RLLM1抗體
hz-6515R ABC2/C17orf71  乳腺癌增強蛋白2抗體
hz-6516R CA8  碳酸酐酶相關蛋白8抗體

滬公網安備 31011702004356號

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